PCR实验室建设所产生的污染源主要有哪些?
PCR实验室属于三级生物安全实验室,其产生的污染源主要有哪些?你了解多少,一起来看看吧。
PCR实验室常见污染物有以下五种:(1)临床样本中含有大量待测微生物;(2)通过科学研究获得质粒克隆;(3)以前分析研究的特定微生物;(4)实验环境中含有大量特殊微生物;(5)前期扩增产品的残留污染。
在 PCR实验室,这也是最容易产生假阳性的污染物。通常,一个典型的 PCR反应可以生成10^9个重复的序列,这样一个 PCR反应就可以产生10^9个重复的序列,在气溶胶中,即使是最小的气溶胶,也可以得到10^6的扩增产物。如果不加以控制,气溶胶化反应物在短期内会污染实验室试剂,
仪表与通风系统会造成严重的实验室污染,并产生大量假阳性结果。RNA扩增技术,如 NASBA (NASBA),转录介导扩增。
不容易产生扩增产物(TMA)、 Qbeta复制酶等,其扩增产物为 RNA,在环境中快速降解。
2.污染预防措施
(1)严格划分实验室,严格遵守
试验室分为试剂准备区、样品预制区、 PCR扩增区、产物分析区等,并配备相应的仪器设备、工作服、手套、取样装置和通风系统。内部区域
必须直接在各自地区组装或包装使用试剂和废物。操作者必须小心防止从污染区,包括头发、眼睛和衣服等被带入清洁区域。
(2)化学清理
试验台面上可用10%次氯酸钠(漂白剂)清洗,再用70%乙醇或清水洗去次氯酸钠。次氯酸钠可以氧化损伤核酸,因此可以停留在试验台表面
分散的产物被摧毁。结果表明,次氯酸钠对提取的 DNA和 PCR扩增产物均无法区分,而用次氯酸钠处理的样品无法进行核酸扩增检测。实际上,某些项目的实际比率
如果需要进入反应管的圆盘需要从污染区转到清洁区,需要用2-10%次氯酸钠溶液浸泡一夜,然后充分冲洗。
(3)扩展产品改性
临床 PCR检测通常包括3~4个步骤:制备核酸提取和扩增检测试剂。样品处理是一种提取目标核酸、 PCR扩增、产物扩增等技术,是一种新的检测方法。PCR方法同时进行 PCR扩增和扩增产物分析。
对以前的扩增产物进行适当的修饰,新的扩增检测应该能被排除,但是为了保证扩增检测不会影响靶核酸,我们必须遵循两个基本原则:
产物经修饰后,可与扩增反应管进行修饰,并可与扩增反应管相区别,但不影响扩增产物序列。
前处理:紫外光照射,酶处理。
修复:补骨脂素、异补骨脂素、盐酸羟胺、引物水解等。
成都杰瑞思专注于整体实验室建设与设计,欢迎选择我们。
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